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經濟快捷的SNP位點研究方法-SNP基因分型
發布時間: 2021-10-11 點擊次數: 1278次SNP,全稱 Single Nucleotide Polymorphisms,是指在基因組上單個核苷酸的變異。目前很多人仍然使用測序法來進行研究,具有準確、直觀的優點。但有一種方法,能間接的研究SNP,且經濟快捷,那就是——SNP基因分型。
其實現原理:熔解溫度(melting temperature,Tm)是指吸光值增加到最大值的一半時的溫度稱為DNA的解鏈溫度或熔點。當實時熒光定量PCR中的熒光探針與靶基因錯配,即靶基因序列上產生了核苷酸變異,他們的熔解溫度比較低。相對而言,沒有突變的靶基因與探針雜交的熔解溫度較高。通過區分熔解溫度的差異,來區分突變型和未突變型(野生型)。
進行SNP基因分型需要注意:
1、將突變的位點放在探針中間。
2、保證兩條探針的熔解溫度相同。
熒光探針中,Taqman探針可進行SNP基因分型。推薦Applied Biosystems公司的Taqman MGB探針,相對普通Taqman探針,與錯配序列的熔解溫度相差更大。
分子信標也可用于SNP基因分型。他的莖環結構比一般線性的分子探針更適合SNP分型,莖環結構與錯配序列雜交的熱穩定性更低,熔解溫度相差也更大。
讀者們可根據自己的實驗需求,選擇合適的方法進行分析。
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